张子雄^1,2 , 黄春琼^2* , 刘国道^2* , 白昌军² , 唐军² , 王文强²

1 海南大学热带农林学院, 海口, 570228; 2 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所, 农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室,儋州, 571737
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 19 篇   
收稿日期: 2018年03月09日    接受日期: 2018年04月23日    发表日期: 2018年05月23日

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本研究为了优化确立柱花草(Stylosanthesguianensis)杂交后代育性分离群体 ISSR-PCR 反应体系。利用正交设计试验，从模板 DNA 和引物 2 个因素、4 个水平对柱花草杂交后代育性分离群体 ISSR-PCR 反应体系进行优化试验。结果表明：反应体系中模板 DNA 75 ng，ISSR 引物 10 μmol/L，2xEasyTaq PCR SuperMix for PAGE (含染料)7.5 μL 时扩增效果最好。并通过对柱花草杂交后代育性分离群体 ISSR-PCR 最佳反应体系进行梯度退火试验，得到引物UBC834 的最佳退火温度为 54.4℃。该反应体系在柱花草 BC1F1 代不育可育分离群体中获得较好的扩增结果，该优化体系为后续筛选与柱花草花粉不育基因连锁的分子标记提供了稳定和可靠参考。 

柱花草；育性分离群体；ISSR-PCR；正交设计；体系优化